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TALEN(transcription activator-like effector nucleases, TALENs)靶向基因修饰/敲除技术是最近发展起来的一项极具革命性的新技术。 TAL (transcription activator-like) effectors是细菌Xanthomonas感染植物时分泌的蛋白分子。 TALEN(transcription activator-like effector nucleases, TALENs)靶向基因修饰/敲除技术是最近发展起来的一项极具革命性的新技术。 TALEN蛋白分子包含DNA结合域和Fok1核酸酶,两个TALEN分子分别结合到靶点两侧,Fok1形成二聚体并发挥切割作用,生成双链断端,细胞内的非同源性末端接合(Non-homologous end joining, NHEJ)修复机制启动,断口被修复同时随机的删除和插入一定数量的碱基,造成移码导致基因失活。 Genomic control enabled by engineered TAL effector proteins.

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小鼠胚胎干细胞(Embryonic Stem Cell,ES)是从小鼠囊胚中分离出的内细胞团(Inner cell Mass,ICM)细胞,它具有向各种组织细胞分化的分化潜能,能在体外培养、传代、药物筛选并保留发育的全能性。 在体外进行遗传修饰后,重新植回小鼠囊胚,它能同小鼠囊胚 供体 镶嵌发育,即胚胎的部分组织或细胞由供体囊胚发育而成,另一部分组织或细胞则由胚胎干细胞发育而成,这种镶嵌发育得到的小鼠称为 嵌合鼠。 2009 - 2017 南京大学-南京生物医药研究院 苏ICP备10073918号-3.

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首先,需要构建转基因载体,通常需要包含启动子、表达片段 microRNA或CDS 及polyA,还可以包含一些额外的元件,如 loxP-STOP-loxP, insulator等。 转基因载体构建完成后,需要通过酶切去除原核载体骨架,然后将回收纯化好的转基因片段注射到小鼠的受精卵里面,转基因片段会随机整合到小鼠基因组中,将注射后的受精卵移植到假孕受体雌鼠子宫,受体雌鼠会生下后代,通过tail DNA PCR可以鉴定出哪些小鼠是整合了转基因片段的后代 founder ,将founder与野生型小鼠交配,可以得到更多的后代用于表达分析。 最低 20,000.00的服务价格. 2009 - 2017 南京大学-南京生物医药研究院 苏ICP备10073918号-3.

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